Prensip ak metòd pou analiz quantitative pa likid chromatography

Mekanis separasyon chromatografi likid la baze sou diferans ki genyen nan afinite eleman yo nan melanj lan pou de faz yo.

Dapre diferan faz estasyonè yo, likid chromatografi divize an likid-solid chromatografi, likid-likid chromatografi ak komodasyon faz chromatografi.Ki pi lajman itilize yo se chromatografi likid-solid ak jèl silica kòm filler ak kwomatografi faz estokaj ak mikrosilik kòm matris.

Dapre fòm nan faz estasyonè, likid chromatografi ka divize an kolòn chromatografi, chromatografi papye ak chromatografi kouch mens.Dapre kapasite adsorption, li ka divize an kwomatografi adsorption, kwomatografi patisyon, kwomatografi echanj ion ak kwomatografi jèl permeation.

Nan dènye ane yo, yo te ajoute yon sistèm koule likid wo-presyon nan sistèm chromatografi kolòn likid la pou fè faz mobil koule rapidman anba presyon ki wo pou amelyore efè separasyon an, kidonk segondè-efikasite (ke yo rele tou wo-presyon) likid chromatografi. te parèt.

PATI
01 Prensip Kantitatif analiz de likid Chromatography

Pou mezire sou baz kalitatif, sibstans ki pi bon kalite yo mande kòm estanda;

Quantification chromatography likid se yon metòd relativman quantitative: se sa ki, kantite analit la nan melanj la estime nan yon kantite li te ye nan echantiyon estanda pi bon kalite.

PATI
02 Baz pou Quantification pa likid Kwomatografi

Kantite eleman ki mezire (W) pwopòsyonèl ak valè repons (A) (wotè pik oswa zòn pik), W = f × A.

Faktè koreksyon kantitatif (f): Li se konstan pwopòsyonèl fòmil kalkil quantitative a, ak siyifikasyon fizik li se kantite eleman ki mezire reprezante pa valè repons inite a (zòn pik).

Faktè koreksyon quantitative a ka jwenn nan kantite li te ye nan echantiyon estanda ak valè repons li yo.

Mezire valè repons nan eleman enkoni a, epi kantite eleman an ka jwenn pa faktè koreksyon quantitative.

PATI
03 Tèm komen nan analiz quantitative

Egzanp (echantiyon): yon solisyon ki gen yon analit pou analiz kwomatografik.Divize an echantiyon estanda ak enkoni.

Creole: Yon pwodwi pi ak yon konsantrasyon li te ye.Echantiyon enkoni (enkoni): melanj ki gen konsantrasyon yo dwe teste.

Pwa echantiyon: Peze orijinal la nan echantiyon an yo dwe teste.

Dilution: Faktè dilution echantiyon enkoni a.

Konpozan: pik kwomatografik yo dwe analize quantitativeman, se sa ki, analit la ki gen kontni se enkoni.

Kantite eleman (kantite lajan): kontni an (oswa konsantrasyon) nan sibstans la yo dwe teste.

Entegerite : Pwosesis enfòmatik pou mezire sipèfisi pik yon pik kwomatografik pa yon òdinatè.

Koub kalibrasyon: Yon koub lineyè nan kontni eleman kont valè repons, ki etabli apati yon kantite lajan li te ye nan sibstans estanda, ki itilize pou detèmine kontni an enkoni nan analit la.

PATI
04 Analiz Kantitatif nan Kwomatografi Likid

1. Chwazi yon metòd kwomatografi ki apwopriye pou analiz quantitative:

l Konfime pik eleman detekte a epi reyalize yon rezolisyon (R) ki pi gran pase 1.5

l Detèmine konsistans (pite) pik kwomatografik eleman yo teste yo

l Detèmine limit deteksyon ak limit quantifikasyon metòd la;sansiblite ak ranje lineyè

2. Etabli yon koub kalibrasyon ak echantiyon estanda diferan konsantrasyon

3. Tcheke presizyon ak presizyon nan metòd quantitative

4. Sèvi ak lojisyèl jesyon kwomatografi ki koresponn lan pou aplike echantiyon koleksyon, pwosesis done ak rapò rezilta yo

PATI
05 Idantifikasyon pik quantitative (kalitatif)

Kalitativman idantifye chak pik kwomatografik yo dwe quantifye

Premyèman, sèvi ak echantiyon estanda a pou detèmine tan retansyon (Rt) nan pik kwomatografik yo dwe quantifye.Lè w konpare tan retansyon an, jwenn eleman ki koresponn ak chak pik kwomatografik nan echantiyon enkoni an.Metòd kalitatif kwomatografik la se konpare tan retansyon an ak echantiyon estanda a.Kritè a Ensifizanplis konfimasyon (kalitatif)

1. Metòd adisyon estanda

2. Sèvi ak lòt metòd an menm tan an: lòt metòd kwomatografik (chanje mekanis a, tankou: lè l sèvi avèk diferan kolòn kwomatografik), lòt detektè (PDA: konparezon spectre, rechèch bibliyotèk spectre; MS: analiz mas spectre, rechèch bibliyotèk spectre)

3. Lòt enstriman ak metòd

PATI
06 Konfimasyon Konsistans Pik Kantitatif

Konfime konsistans pik kwomatografik (pite)

Asire ke gen yon sèl eleman mezire anba chak pik kwomatografik

Tcheke pou entèferans ki soti nan sibstans ko-elution (enpurite)

Metòd pou Konfimasyon Konsistans Pik Kwomatografik (Purite)

Konpare Spectrogram ak Detektè Photodiode Matrix (PDA).

Idantifikasyon pite pik

2996 Teyori Angle Pite

Metòd kantitatif yo souvan itilize nan PATI 07

Metòd koub estanda, divize an metòd estanda ekstèn ak metòd estanda entèn:

1. Ekstèn metòd estanda: ki pi itilize nan chromatografi likid

Yo te prepare yon seri echantiyon estanda nan konsantrasyon li te ye lè l sèvi avèk echantiyon pi bon kalite nan konpoze yo dwe teste kòm echantiyon estanda.enjekte nan kolòn nan jiska valè repons li (zòn pik).
Nan yon seri sèten, gen yon bon relasyon lineyè ant konsantrasyon echantiyon estanda a ak valè repons lan, sètadi W= f × A , epi yo fè yon koub estanda.

Anba egzak menm kondisyon eksperimantal yo, enjekte echantiyon enkoni pou jwenn valè repons eleman yo dwe mezire a.Dapre koyefisyan li te ye f , yo ka jwenn konsantrasyon nan eleman yo dwe mezire.

Avantaj ki genyen nan metòd ekstèn estanda:senp operasyon ak kalkil, li se yon metòd quantitative souvan itilize;pa bezwen pou chak eleman yo dwe detekte ak eliye;echantiyon estanda obligatwa;kondisyon mezi echantiyon estanda ak echantiyon enkoni yo ta dwe konsistan;volim piki a ta dwe egzak.

Dezavantaj metòd ekstèn estanda:Kondisyon eksperimantal yo oblije wo, tankou sansiblite detektè a, to koule a, ak konpozisyon faz mobil lan pa ka chanje;volim chak piki ta dwe gen bon repetibilite.

2. Entèn metòd estanda: egzat, men anbarasman, ki pi itilize nan metòd estanda

Yon kantite lajan li te ye nan estanda entèn la ajoute nan estanda a fè yon estanda melanje, ak yon seri de estanda k ap travay nan konsantrasyon li te ye yo prepare.Rapò molè estanda a estanda entèn nan estanda melanje a rete san okenn chanjman.Enjekte nan kolòn kwomatografik la epi pran (zòn pik echantiyon estanda / zòn pik echantiyon estanda entèn) kòm valè repons lan.Dapre relasyon lineyè ki genyen ant valè repons lan ak konsantrasyon estanda k ap travay la, sètadi W= f×A, yon koub estanda fèt.

Yo ajoute yon kantite estanda entèn yo konnen nan echantiyon enkoni a epi yo enjekte nan kolòn nan pou jwenn valè repons eleman yo dwe mezire a.Dapre koyefisyan li te ye f , yo ka jwenn konsantrasyon nan eleman yo dwe mezire.

Karakteristik metòd estanda entèn yo:Pandan operasyon an, echantiyon an ak estanda entèn yo melanje ansanm ak sou fòm piki nan kolòn chromatografik la, kidonk osi lontan ke rapò kantite lajan an nan eleman ki mezire ak estanda entèn la nan solisyon an melanje se konstan, chanjman nan volim echantiyon an. pa pral afekte rezilta quantitative yo..Metòd estanda entèn la konpanse enfliyans volim echantiyon an, e menm faz mobil ak detektè a, kidonk li pi egzak pase metòd estanda ekstèn lan.

PATI
08 Faktè ki afekte rezilta analiz kantitatif yo

Move presizyon ka koze pa:

Pa kòrèk entegrasyon zòn pik, dekonpozisyon echantiyon oswa enpurte prezante pandan preparasyon echantiyon, flakon echantiyon pa sele, echantiyon oswa volatilizasyon sòlvan, preparasyon echantiyon kòrèk, pwoblèm piki echantiyon, preparasyon estanda entèn kòrèk.

Rezon posib pou move presizyon:

Move entegrasyon pik, pwoblèm piki oswa piki, dekonpozisyon echantiyon oswa enpurte prezante pandan preparasyon echantiyon, pwoblèm kwomatografik, repons detektè degrade.